Proteiner – Livets essens
Proteiner er makromolekyler, der består af én eller flere kæder af aminosyrer. Det humane genom specificerer 20 forskellige aminosyrer. Rækkefølgen af disse er den primære differentierende faktor for proteiner og påvirker deres foldning til specifikke tredimensionelle strukturer. Proteiner udfører en lang række vitale funktioner i organismer, herunder katalyse, transport og signaloverførsel. Derudover produceres mange proteiner industrielt til en række anvendelser, herunder lægemidler.
Et udvalg af bioassays er tilgængeligt til at bestemme koncentrationen af oprenset protein. Disse bioassays kræver dog, at eksperimentatoren laver en standardkurve, som, hvis det samme protein bruges, kan være meget dyrt, og hvis et andet protein bruges, kan medføre store systematiske fejl.
Alternativt kan nogle proteiner kvantificeres ved absorptionsspektroskopi. Nogle få aminosyrer (tryptofan, tyrosin og fenylalanin) er aromatiske og absorberer UV-lys ved 280 nm. Afhængigt af mængden af aromatiske aminosyrer, et protein består af, vil det absorbere mere eller mindre lys ved 280 nm, dvs. have en højere eller lavere ekstinktionskoefficient. Ekstinktionskoefficienten kan beregnes teoretisk, men det kan give værdier, der afviger med op til 10 %. Alternativt kan den bestemmes eksperimentelt. Det kræver, at der laves en standardkurve for det specifikke protein på det specifikke spektrofotometer.
Introduktion til mærkningsfri proteinmålinger
Mens proteiners ekstinktionskoefficienter varierer stærkt, er det vist, at proteiner har meget ens værdier af brydningsindeksinkrementet α, dvs. proteinets brydningsindeksafhængighed af proteinkoncentrationen. Måling af proteinets brydningsindeks er derfor en hurtig og nem måde at få proteinkoncentrationen på uden at skulle lave en standardkurve. Som en yderligere fordel muliggør denne metode også direkte kvantificering af dit protein uden forudgående fortynding.
Alt, der skal bruges, er vores SpectroCuvette™ One, 0,5 µL prøve og et UV-VIS-spektrofotometer, for eksempel Shimadzu, PerkinElmer, Thermo Ficher, Mettler Toledo, VWR eller tilsvarende.