Enzymer – livets katalyse
Enzymer er biomolekyler, der produceres i levende organismer. De er biokatalysatorer og fremskynder specifikke biokemiske reaktioner. Biokemiske reaktioner er kemiske reaktioner, der foregår i den levende celle, ofte med hjælp fra enzymer. Som katalysatorer kan enzymer fremme den samme kemiske reaktion uden at blive forbrugt. Enzymer er proteiner og består af lange kæder af specifikke aminosyresekvenser, som folder sig til deres unikke form. Enzymer har en kløft kaldet det aktive site, som er den del af enzymet, som substrater binder til. Det aktive site er det område, hvor en reaktion katalyseres. Når et substrat er i nærheden, danner enzymet en komplementær form til substratet for at binde det. Dette koncept kendes også som induced fit-modellen. Enzymernes processivitet bestemmes af deres aktivitet eller det antal substratenheder, de kan danne ud fra et substrat.
Enzymaktiviteten måles sædvanligvis i en totrinsproces med et enzymassay. Assayet kan enten måle forsvinden af stivelse eller fremkomsten af disaccharider. For at måle enten af disse er første trin at tilsætte en reaktant, som for eksempel muliggør et farveudslag. I andet trin kan farven kvantificeres spektrofotometrisk, og enzymaktiviteten måles.
Fremskridtskurve for en enzymreaktion. Michaelis–Menten-ligningen beskriver, hvordan denne hældning varierer med substratkoncentrationen.
Introduktion til label-fri kinetikmålinger
Direkte label-fri detektion af enzymatisk aktivitet med et substrat kan overvåges via ændringen i opløsningens iboende egenskab, brydningsindeks, efterhånden som produkt dannes over tid. Traditionelt har et refraktometer været nødvendigt til bestemmelse af brydningsindeks. Den nye SpectroCuvette™ One har et indbygget optisk filter, så ændringen i brydningsindeks som følge af den enzymatiske reaktion kan måles i realtid med et konventionelt spektrofotometer.
Alt, der skal bruges, er vores SpectroCuvette™ One, 0.5 µL prøve og et UV-VIS-spektrofotometer, for eksempel Shimadzu, PerkinElmer, Thermo Ficher, Mettler Toledo, VWR eller tilsvarende.