Spektrofotometre bruges primært til at måle koncentrationen af opløste stoffer i opløsning ved at måle mængden af det lys, der absorberes af opløsningen.
For at estimere mængden af absorberet lys bruger spektrofotometre Beer-Lamberts lov.
Beer-Lamberts lov beskriver sammenhængen mellem dæmpningen af lys og egenskaberne ved opløsningen, hvor lyset udbreder sig:
A = εcl
hvor A er absorbans, c er koncentrationen, l er vejlængden, og ε beskriver absorptionskoefficienten.
Beer-Lamberts lov angiver, at det absorberede lys er proportionalt med det opløste stof i en opløsning og tykkelsen af opløsningen.